技術(shù)服務(wù)

試驗材料

1.客戶提供抗原，包括必要的質(zhì)控數(shù)據(jù)。
2.抗原數(shù)量、保存方式和運(yùn)輸方式需要提前溝通。
3.免疫方式和小鼠的種類和數(shù)量需要提前溝通。

步驟

服務(wù)內(nèi)容

周期（周）

制備多抗

1.準(zhǔn)備3只健康、6-8周齡Balb/c小鼠，使用其他品系小鼠需要提前溝通。
2.使用水溶性佐劑或者弗氏佐劑，免疫2－3次。佐劑類型和免疫方案需要提前溝通。
3.采集小鼠血清，包被免疫原，采用ELISA方法檢測效價。
4.提交效價檢測結(jié)果給客戶，如果血清效價合格，采血，分離抗血清；如果血清效價不合格，項目停止。

6-8周

純化多抗

1.合并小鼠血清，采用Protein A/G親和層析純化小鼠血清多抗IgG。
2. SDS-PAGE電泳鑒定純化抗體。

1-2周

融合實驗

效價合格，客戶同意進(jìn)行融合實驗：
1.選取效價最高的小鼠，取脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合。
2.有限稀釋融合細(xì)胞，96孔板克隆化【鋪5-10塊板】。
3. HAT選擇雜交瘤細(xì)胞。
4.包被免疫原，進(jìn)行ELISA檢測，檢測出1-100個抗原陽性IgG分泌細(xì)胞。
5.挑取陽性克隆，微量-80度凍存細(xì)胞【凍存細(xì)胞可保存1年以上】。
6.每株陽性克隆提供100ul--1ml雜交瘤細(xì)胞上清，供客戶進(jìn)行檢測。
7.客戶根據(jù)HIAT或自己的ELISA檢測結(jié)果，挑選1-10株陽性克隆。
8. HIAT復(fù)蘇、擴(kuò)增和凍存客戶確定的1-10株陽性克隆，丟棄其余克隆。如果客戶需要保存其余克隆，需要提前溝通，另行約定費(fèi)用和保存方式。

3-4周

亞克隆

根據(jù)客戶的要求，選取1個陽性克隆進(jìn)行亞克隆：
1. 每個克隆做2次以上96孔板有限稀釋培養(yǎng)。
2. ELISA挑選3-5個亞克隆細(xì)胞株。
3. 放大至T-25 Flask培養(yǎng)，ELISA再次檢測。
4.常規(guī)凍存細(xì)胞，每個亞克隆凍存3管細(xì)胞。

4-8周 

報告與送貨

1.免疫前血清（20μl/只）。
2.多抗血清（>1.0ml/只）或純化的鼠血清多抗IgG。
3.提供實驗報告，包括免疫流程、效價測定結(jié)果、細(xì)胞融合和細(xì)胞亞克隆過程ELISA檢測結(jié)果，和純化鼠血清抗體的SDS-PAGE電泳結(jié)果。
4.與客戶協(xié)商后確定送貨方式，物流費(fèi)用由客戶承擔(dān)。免費(fèi)重復(fù)送貨1次。1次以上另行計費(fèi)。