技術(shù)服務(wù)

服務(wù)介紹：

ELISA檢測(cè)是免疫檢測(cè)中的一項(xiàng)重要技術(shù)，該法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及可自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。目前已廣泛應(yīng)用于臨床檢測(cè)及研究領(lǐng)域。本法不僅可以用來測(cè)定抗體，而且也可用于測(cè)定體液中的抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。ELISA方法也合適用于經(jīng)mRNA表達(dá)譜芯片、蛋白芯片或蛋白質(zhì)組學(xué)（質(zhì)譜）等實(shí)驗(yàn)找出差異蛋白后，進(jìn)一步驗(yàn)證差異蛋白。

間接法ELISA檢測(cè)：用特異性抗原包被固相載體，加入待測(cè)的抗體樣品反應(yīng)后，再加入酶標(biāo)二抗，經(jīng)底物顯色后測(cè)定。

夾心法ELISA檢測(cè)：用第一抗原或抗體包被固相載體，加入待測(cè)的抗體或抗原反應(yīng)后，再加入酶標(biāo)的第二抗原或抗體，經(jīng)底物顯色后測(cè)定，即可計(jì)算出待測(cè)抗原的量。此方法所用抗原一般為大分子抗原，如蛋白等，不適用于多肽等半抗原。

競(jìng)爭(zhēng)法ELISA檢測(cè)：用特異性抗體包被固相載體，同時(shí)加入酶標(biāo)抗原和待測(cè)抗原的混合物樣本，待測(cè)抗原將與酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相上抗體結(jié)合。經(jīng)底物顯色后測(cè)定，計(jì)算兩組數(shù)值之差即可推出待測(cè)抗原的量。此方法常用于測(cè)定小分子抗原。

服務(wù)內(nèi)容：
提供間接法ELISA檢測(cè)、夾心法ELISA測(cè)定和競(jìng)爭(zhēng)法ELISA測(cè)定。
 
樣品要求：
1.客戶提供含待測(cè)樣品的標(biāo)本（血清、血漿等），我們根據(jù)客戶的需要（定性、定量）制定技術(shù)服務(wù)路線。
2.需提供待檢測(cè)抗體和包被用抗原。
3.檢測(cè)的樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清、人和動(dòng)物的血清、血漿時(shí)，樣本收集后應(yīng)立即-20度保存，若長(zhǎng)期保存應(yīng)-80度保存。
4.樣本量的要求：若一個(gè)指標(biāo)做復(fù)孔檢測(cè)應(yīng)不少于250ul，做單孔檢測(cè)應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足最好提供500ul以上。
5.客戶的樣本收集后，立即按要求保存，切忌反復(fù)凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運(yùn)輸，郵寄前請(qǐng)與技術(shù)支持溝通確認(rèn)。

送樣運(yùn)輸要求：
1、動(dòng)植物組織樣本(干冰運(yùn)輸)：
準(zhǔn)確稱取動(dòng)物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機(jī)械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測(cè)定。
2、血清樣本(干冰運(yùn)輸)：
全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測(cè);或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測(cè)。
3、血漿樣本(干冰運(yùn)輸)：
可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測(cè);或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測(cè)。
4、細(xì)胞樣本：
貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS沖洗2次后，用細(xì)胞刮將細(xì)胞小心刮下來，將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。
懸浮細(xì)胞：將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。
細(xì)胞上清：標(biāo)本于2-8℃，3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗(yàn)，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。

實(shí)驗(yàn)流程(具體步驟以試劑盒說明書為準(zhǔn)):
1.樣本準(zhǔn)備：血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清;
2.操作步驟：
處理樣本配制標(biāo)準(zhǔn)品—加樣(標(biāo)準(zhǔn)品及樣本)—洗板，加檢測(cè)抗體溶液，孵育—洗板，加酶溶液，孵育— 洗板，加TMB底物— 加終止液50ul，立即450nm讀數(shù)(雙抗夾心法)
處理樣本配制標(biāo)準(zhǔn)品—加樣(標(biāo)準(zhǔn)品及樣本)—加酶溶液—加檢測(cè)抗體— 混勻孵育— 洗板，加TMB顯色— 加終止液50ul，立即450nm讀數(shù)(競(jìng)爭(zhēng)法)
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：有樣本OD值代入標(biāo)曲中計(jì)算出濃度，結(jié)果以EXCEL形式發(fā)出。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：

ELISA檢測(cè)（代測(cè)），360元/次/96T