產(chǎn)品中心

總RNA提取試劑(Trizol)

Total RNA Extraction Reagent(Trizol)

包裝規(guī)格：

本產(chǎn)品僅用于科研，禁止用于醫(yī)藥、臨床醫(yī)療、食品和化妝品等用途。

產(chǎn)品介紹：
總RNA提取試劑，是廣譜型總RNA提取試劑。 本試劑適用于動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中總RNA的提取。TRIzol中充分裂解樣品的同時(shí)能夠最大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后，會分成三層，RNA分布在上層上清水相中。收集上清水相后，經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。
可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A篩選、體外翻譯、構(gòu)建cDNA文庫等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
無污染：整套試劑盒采用RNase-Free處理。
適用廣：適用于動(dòng)物組織，植物組織，各種微生物和培養(yǎng)細(xì)胞等各類樣品材料的RNA提取。
易操作：操作簡便，提取過程僅需 30 分鐘左右。 
高質(zhì)量：有效保證RNA的完整性，回收RNA 效率高，純度高，沒有蛋白和其他雜質(zhì)污染。OD260/OD280的比值可達(dá)1.9~2.2，可用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請先閱讀注意事項(xiàng)） 
樣品處理：
1.植物組織：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織剪碎后直接在TRIzol中迅速研磨，每50 ~ 100mg組織加入1ml TRIzol，混勻。注意：樣品體積一般不要超過TRIzol體積的10%。
2.動(dòng)物組織：取新鮮或－80°C凍存動(dòng)物組織盡量剪碎，每30 ~ 100mg組織加入1ml TRIzol，勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。或在液氮中研磨成粉后，轉(zhuǎn)入新的離心管中加入1ml TRIzol混勻。注意：樣品體積一般不要超過TRIzol體積的10%。
3.貼壁細(xì)胞：直接在培養(yǎng)板中加入裂解液裂解細(xì)胞，按培養(yǎng)板面積每10cm²加入1ml TRIzol，用移液器反復(fù)吹打，直到看不到明顯的細(xì)胞團(tuán)為止。TRIzol加入量不足會有DNA污染。
4.懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞。每5 ~ 10×10⁶動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每1×10⁷細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol混勻。用移液器反復(fù)吹打，直到看不到明顯的細(xì)胞團(tuán)為止。不需要洗滌，避免mRNA降解。
5.若提取細(xì)菌RNA，SpinPure?細(xì)菌RNA快速提取試劑盒(離心柱型)（目錄號：2120）；若提取血液或液體RNA，推薦TRI LS Reagent液體樣品總RNA抽提試劑(TRIzol LS Reagent)（目錄號：2107）。

提取步驟：
1.將處理后的樣品在室溫靜置5~10分鐘，使得核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
2.可選步驟： 4°C 12,000rpm 離心10分鐘，取上清轉(zhuǎn)入一個(gè)新的RNase free的離心管中。（當(dāng)樣品富含蛋白質(zhì)、脂肪、多糖或是細(xì)胞外物質(zhì)例如肌肉、脂肪組織或植物的塊莖部分時(shí)可能需要額外的分離步驟。）
3.每1ml TRIzol加200μl氯仿。劇烈振蕩15秒并將其在室溫下靜置3分鐘。
4.在4°C 12,000rpm 離心10分鐘，樣品會分成三層：下層有機(jī)層，中間蛋白層和上清水相層 ，RNA存在于上清水相層中。
5.將上清水相轉(zhuǎn)移到新的離心管中，加入等體積異丙醇。 顛倒混勻后室溫靜置10分鐘。（不要吸取沉淀物和漂浮物。漂浮物可能會黏附在槍頭的外壁，注意不能將其帶入離心管中。）
6.4°C 12,000 rpm 離心10分鐘，棄上清，此時(shí)在管底形成膠裝沉淀。
7.每使用1ml TRIzol用1ml 75%乙醇對沉淀進(jìn)行震動(dòng)渦旋洗滌。
8.4°C 12,000 rpm離心3分鐘，棄上清（不要吸取RNA沉淀）。剩余的少量液體可短暫離心，然后用移液器 吸出。
9.室溫靜置2 ~ 3分鐘。加入30 ~ 100μl Rnase-free H2O，充分溶解RNA。沉淀不要過分干燥，以免難于溶解。洗脫后的RNA可立即使用或保存在－80°C。

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