產(chǎn)品中心

RNAfixer無(wú)液氮RNA樣品儲(chǔ)存液

RNAfixer RNA Stabilization Reagent
無(wú)需液氮，運(yùn)輸方便，操作容易，樣品25℃運(yùn)輸一周不影響RNA提取

包裝規(guī)格：

一.產(chǎn)品介紹：
RNAfixer是一種水相的，無(wú)毒的組織保存液體，可以迅速滲入新鮮組織細(xì)胞的胞漿中，在非凍狀態(tài)下原位穩(wěn)定和保護(hù)細(xì)胞內(nèi)的RNA。取下組織薄片后立刻浸入RNAfixer保存并不影響將來(lái)提取RNA的質(zhì)量和數(shù)量。RNAfixer消除了RNA樣品需要立刻處理或者必須液氮保存的不方便。浸入RNAfixer后，新鮮組織細(xì)胞中RNA可以完好的在37℃下保存一天, 在25℃下保存一周, 4℃下保存一個(gè)月, 在-20℃或-80℃下長(zhǎng)期保存。RNA 病毒樣品(如HCV 和HIV)可在37℃保存一個(gè)月。

二.適用范圍：
適用于動(dòng)物組織（心，肝，腎，肌肉，睪丸，腦，脾等）、培養(yǎng)細(xì)胞、RNA 病毒、果蠅、細(xì)菌、白細(xì)胞、全血、一些植物組織等。

三.儲(chǔ)存條件：
透明液體， 室溫(18-25℃)保存期限為12 個(gè)月，如果使用時(shí)發(fā)現(xiàn)有沉淀或者析出，可以在37℃加熱重新溶解后使用，不影響產(chǎn)品質(zhì)量。

四.產(chǎn)品特點(diǎn)： 
1.操作容易：將組織剪成適當(dāng)大小，浸沒(méi)在RNAfixer中即可使其RNA不被降解。
2.無(wú)需液氮：使樣品的保存不需液氮,干冰或-80℃冰箱, 尤其適用于臨床和野外樣品的快速和大規(guī)模采集。
3.方便運(yùn)輸：處理過(guò)的樣品能在25℃保存一周, 使樣品郵寄和運(yùn)輸變得容易和便宜, 有利學(xué)術(shù)合作和交流。
4.多次凍融: 經(jīng)RNAfixer處理的樣品可反復(fù)凍融多次, 其間可對(duì)樣品進(jìn)行各種處理而不影響最終提取的RNA 的質(zhì)量。
5.可比性強(qiáng): RNAfixer能減少大規(guī)模樣品處理中的誤差, 增加各次實(shí)驗(yàn)數(shù)間的可比性,對(duì)大規(guī)模基因表達(dá)譜的分析尤其有用。
6.兼容性廣: 多種總RNA提取試劑都可以用來(lái)提取保存在RNAfixer內(nèi)的樣品。還可直接用于組織切片, 免疫學(xué)和流式細(xì)胞分析而不影響RNA 提取的質(zhì)量。

五.使用方法：
RNAfixer只用于新鮮組織，浸泡入RNAfixer前禁止冷凍組織。只需要迅速將新鮮組織剪成長(zhǎng)，寬，高任意一邊厚度<0.5厘米浸泡入RNAfixer即可（只要有一邊厚度不超過(guò)0.5厘米，RNAfixer可以迅速滲透，其它兩邊的尺寸并不重要）。將新鮮組織浸泡在5倍體積的RNAfixer中，按照指示存放在適當(dāng)?shù)臏囟取?

1.動(dòng)物組織：RNAfixer并不破壞或者溶解組織結(jié)構(gòu)，因此浸泡在RNAfixer中達(dá)到滲透平衡的組織可以從RNAfixer中取出，然后切成更小的塊，然后放回到RNAfixer中下次繼續(xù)使用。小器官如小鼠肝，腎，和脾不需要剪切，可以完整的存放在RNAfixer中。

2.植物組織：很多植物組織直接浸泡入RNAfixer即可，有的植物有天然滲透屏障如臘質(zhì)保護(hù)層，需要先破壞掉臘質(zhì)層，便于RNAfixer滲透。

3.組織培養(yǎng)細(xì)胞：細(xì)胞吹打下來(lái)后，離心收集細(xì)胞,棄上清，用冰浴的PBS緩沖液洗一次去除殘留培養(yǎng)液。將細(xì)胞懸浮在少量PBS緩沖液中。加入五到十倍體積RNAfixer, 混均。

4.血和血漿：和紅細(xì)胞和血清分離的白細(xì)胞可以和組織培養(yǎng)細(xì)胞一樣的保存。RNAfixer也可以保存抗凝全血，血清和血漿。對(duì)于全血加入3倍體積RNAfixer，混勻。

5.酵母：離心收集3X108的細(xì)胞（>12，000g離心兩分鐘），立刻將細(xì)胞團(tuán)重懸在0.5–1 ml 的RNAfixer中。酵母細(xì)胞可以保存在RNAfixer中25℃8小時(shí)或者4℃一個(gè)星期。如果要保存存更長(zhǎng)時(shí)間，將酵母細(xì)胞在RNAfixer中放置一個(gè)小時(shí)后， 再次于>12,000g離心5分鐘，將酵母細(xì)胞團(tuán)放入液氮瞬時(shí)冷凍后放置于–80℃儲(chǔ)存。

6.細(xì)菌：細(xì)菌并不能在RNAfixer 中生長(zhǎng)，但是RNAfixer并不破壞細(xì)菌，E. coli在4℃ 保存一個(gè)月仍舊可以提出完整的RNA。

六.RNAfixer中樣本的存放：
1.存放在–80℃：建庫(kù)樣品長(zhǎng)期保存用。將RNAfixer中樣本放置于4℃過(guò)夜，然后將樣本撈出，盡量去除干凈RNAfixer液體，然后放置于–80℃. 對(duì)于組織培養(yǎng)細(xì)胞，則不需要去除RNAfixer，直接冷凍于–80℃，并不會(huì)裂解細(xì)胞。樣品使用時(shí)可以在室溫融化，并且還可以再次冷凍而不影響RNA的完整性和產(chǎn)量。

2.存放在–20℃：將RNAfixer中樣本放置于4℃過(guò)夜，然后轉(zhuǎn)移到–20℃。在–20℃樣品并不會(huì)被冰凍，但是可能會(huì)形成一些結(jié)晶，這并不會(huì)影響將來(lái)的RNA提取。樣品使用時(shí)可以在室溫融化，并且還可以再次冷凍而不影響RNA的完整性和產(chǎn)量。

3.存放在4℃：樣本可以在4℃存放一個(gè)月。

4.存放于25℃：存放于25℃樣本的RNA在一周內(nèi)保持完整，保存兩周的樣品RNA有輕微降解，勉強(qiáng)能用于northern analysis, 但是質(zhì)量足夠用于nuclease protection assay or RT-PCR analysis。

5.存放于37℃：存放于37℃樣本的RNA在24小時(shí)內(nèi)保持完整，3天的時(shí)候有部分降解。

七.RNAfixer保存樣本的RNA提取：
將樣本從RNAfixer中取出，RNAfixer可以直接倒入水池，用自來(lái)水沖即可，不需特殊處理。

1. 組織：用干凈鑷子將樣品從RNAfixer中撈出，用吸水紙吸去殘留的RNAfixer后，和新鮮組織一樣用液氮研磨，然后用Trizol（貨號(hào)：2101B）勻漿處理提取RNA。

2. 細(xì)胞：對(duì)于存儲(chǔ)在RNAfixer中的細(xì)胞有兩種選擇，一是從細(xì)胞和RNAfixer混合物中加10倍體積Trizol（貨號(hào)：2101B）直接提取，另一種方法是離心沉淀細(xì)胞，去除RNAfixer后用Trizol（貨號(hào)：2101B）提取RNA。

a. 去除RNAfixer后提取RNA：存放于RNAfixer中的細(xì)胞變得不那么脆弱，可以承受較高的離心速度而不被裂解。我們有在5000g離心成功收集細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn)， 由于每種細(xì)胞的強(qiáng)度不一樣， 可以先用不重要的細(xì)胞做個(gè)預(yù)試驗(yàn)，以保證在使用的速度下離心不會(huì)破壞細(xì)胞。另一個(gè)選擇是在離心前加等體積的PBS稀釋RNAfixer和細(xì)胞的混合物，以減少溶液的密度，使細(xì)胞溶液可以沉淀下來(lái)。

b. 不去除RNAfixer，直接提取RNA：也可以直接加10倍體積的一步法提取試劑（如TRIpure，TRI reagent）到細(xì)胞和RNAfixer的混合物，然后按照正常步驟操作。

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