技術(shù)服務(wù)

真核哺乳動(dòng)物細(xì)胞憑借蛋白折疊和翻譯后修飾的優(yōu)點(diǎn)，使其蛋白更接近天然蛋白，從而獲得與天然蛋白相同的生物活性。由哺乳動(dòng)物系統(tǒng)表達(dá)的重組蛋白通常應(yīng)用于功能蛋白，抗體生產(chǎn)和臨床疫苗等。

我們提供的哺乳動(dòng)物細(xì)胞重組蛋白表達(dá)服務(wù)，主要包括目標(biāo)基因生物信息學(xué)分析，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)，穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建，以及重組抗體的生產(chǎn)。我們通常采用無(wú)血清懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，對(duì)HEK293（人胚腎細(xì)胞）和CHO（中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞）等真核宿主細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

蛋白表達(dá)服務(wù)表單填寫(xiě)：蛋白質(zhì)表達(dá)純化服務(wù)表單

服務(wù)內(nèi)容簡(jiǎn)介

1.高表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建與優(yōu)化
將客戶的cDNA克隆至哺乳動(dòng)物瞬時(shí)/穩(wěn)定表達(dá)載體上，同時(shí)我們可以根據(jù)客戶的要求對(duì)每個(gè)載體添加分泌信號(hào)肽或純化標(biāo)簽。在此基礎(chǔ)上，我們還可以幫助客戶優(yōu)化流程，生產(chǎn)出高效穩(wěn)定的細(xì)胞系。

2.穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建
穩(wěn)定基因表達(dá)是將目的基因克隆到哺乳動(dòng)物穩(wěn)定表達(dá)載體上，整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作流程分為轉(zhuǎn)染，篩選、細(xì)胞分離和評(píng)估（評(píng)估克隆在無(wú)血清培養(yǎng)條件下的表達(dá)量和適應(yīng)性），目的是使之可以長(zhǎng)期穩(wěn)定生產(chǎn)。

3.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)（TGE）
相較于穩(wěn)定基因表達(dá)，TGE主要用于短期內(nèi)制備蛋白。我們的瞬時(shí)表達(dá)使用的是無(wú)血清懸浮培養(yǎng)的方法，在完成表達(dá)純化后，交付給客戶重組蛋白。（注：轉(zhuǎn)染后的檢測(cè)包括：PCR檢測(cè)目的基因，SDS-PAGE及Western blot檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)情況）

4.生產(chǎn)工藝優(yōu)化
我們會(huì)對(duì)表達(dá)過(guò)程及表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行及時(shí)優(yōu)化，預(yù)測(cè)細(xì)胞表達(dá)量的同時(shí)還會(huì)對(duì)增長(zhǎng)率，轉(zhuǎn)種率，細(xì)胞群，以及表達(dá)條件等進(jìn)行全面分析。

5.重組蛋白鑒定
通過(guò)親和層析，離子交換層析和凝膠過(guò)濾層析等方法純化蛋白之后，我們有完備的蛋白檢測(cè)手段：SDS-PAGE或Native-PAGE檢測(cè)，Western blotting，吸收光譜，N末端序列測(cè)定，質(zhì)譜分析，核磁共振波譜分析。

細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染蛋白表達(dá)能夠在短期內(nèi)得到毫克至克級(jí)的重組蛋白，廣泛地應(yīng)用于基因產(chǎn)物的快速表達(dá)及蛋白質(zhì)的小規(guī)模制備等方面。細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)能夠快速靈活的制備重組蛋白，細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后1-4天內(nèi)即能可收獲并進(jìn)行分析。以CHO（中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞）和HEK293（人胚腎細(xì)胞）為表達(dá)宿主進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，能夠獲得大量的培養(yǎng)上清液，可生產(chǎn)毫克至克級(jí)的重組蛋白。目前，瞬時(shí)表達(dá)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于抗體生產(chǎn)，疾病診斷，疫苗開(kāi)發(fā)等多個(gè)領(lǐng)域。

服務(wù)項(xiàng)目	服務(wù)內(nèi)容	服務(wù)周期	交付內(nèi)容
基因合成 亞克隆	基因合成	3~4周	基因構(gòu)建 測(cè)序報(bào)告
	載體構(gòu)建
	質(zhì)粒制備
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染	細(xì)胞傳代培養(yǎng)	1~2周	瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)與檢測(cè) 純化報(bào)告 純化產(chǎn)物
	細(xì)胞轉(zhuǎn)染
	收獲細(xì)胞
表達(dá)純化	表達(dá)小試	3~4周

哺乳動(dòng)物CHO穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)，與瞬時(shí)轉(zhuǎn)染不同，穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建是指外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞并整合到細(xì)胞的染色體上，使宿主細(xì)胞可長(zhǎng)期表達(dá)目的基因，因此也稱為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。

項(xiàng)目	服務(wù)內(nèi)容	構(gòu)建周期	最終交付
基因合成&亞克隆	密碼子優(yōu)化&基因合成	4周	表達(dá)載體；
	載體構(gòu)建&質(zhì)粒制備		測(cè)序報(bào)告；
細(xì)胞轉(zhuǎn)染	細(xì)胞轉(zhuǎn)染	4周	3株穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株； 0.5~1mg 90%； 純度蛋白；
	表達(dá)檢測(cè)（WB或ELISA）
穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建	壓力篩選	2月
	穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選
	蛋白生產(chǎn)
	細(xì)胞凍存