產(chǎn)品中心

總蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品介紹：
本試劑盒提供全套試劑，適用于從各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞（原代或傳代細(xì)胞、貼壁或懸浮細(xì)胞等）和各種實(shí)體軟組織（如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織）提取總蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，無(wú)須超速離心機(jī)。本試劑盒含有的獨(dú)特變性劑能夠溶解細(xì)胞膜包括細(xì)胞質(zhì)膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等蛋白研究。

產(chǎn)品配制和儲(chǔ)存：
為方便運(yùn)輸，提供PMSF為晶體狀，收到后，可短暫離心后，加入1ml無(wú)水乙醇或者異丙醇溶解成100mM PMSF儲(chǔ)液，2-8℃保存至少半年，－20℃長(zhǎng)期保存，可分裝成小份貯存于-20℃。TPEB可2-8℃保存半年，－20℃長(zhǎng)期保存。如TPEB有沉淀析出，可37℃-60℃水浴重新溶解完全后回復(fù)到室溫使用。

使用方法：
A. 細(xì)胞總蛋白提取
1. 每500 μl裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入5 μl PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 取5-10×106個(gè)細(xì)胞，在4℃，500 g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106個(gè)細(xì)胞中加入500 μl冷的裂解液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
5. 在4℃，16,000 g條件下離心15分鐘。
6. 快速將上清轉(zhuǎn)移至另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。

B. 組織總蛋白提取
1. 每500 μl裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入5 μl PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 取100 mg組織樣本剪碎，加入裂解液，用組織勻漿器勻漿至無(wú)明顯肉眼可見(jiàn)固體。
3. 將組織勻漿吸入另一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃，16000 g條件下離心5分鐘。
4. 快速將上清轉(zhuǎn)移至另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。
上述蛋白提取物可立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，或分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br /> 注意事項(xiàng)：1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑可冰上預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。
2. 整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫狀態(tài)。
3. 蛋白濃度用BCA法測(cè)定 。