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      總蛋白提取試劑盒

      產(chǎn)品編號(hào):7008A

      產(chǎn)品規(guī)格:100ml

      產(chǎn)品價(jià)格:702

      包裝:

      儲(chǔ)存條件:4℃

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      總蛋白提取試劑盒

      產(chǎn)品介紹:
      本試劑盒提供全套試劑,適用于從各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞(原代或傳代細(xì)胞、貼壁或懸浮細(xì)胞等)和各種實(shí)體軟組織(如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織)提取總蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便,無(wú)須超速離心機(jī)。本試劑盒含有的獨(dú)特變性劑能夠溶解細(xì)胞膜包括細(xì)胞質(zhì)膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等蛋白研究。

      產(chǎn)品配制和儲(chǔ)存:
      為方便運(yùn)輸,提供PMSF為晶體狀,收到后,可短暫離心后,加入1ml無(wú)水乙醇或者異丙醇溶解成100mM PMSF儲(chǔ)液,2-8℃保存至少半年,-20℃長(zhǎng)期保存,可分裝成小份貯存于-20℃。TPEB可2-8℃保存半年,-20℃長(zhǎng)期保存。如TPEB有沉淀析出,可37℃-60℃水浴重新溶解完全后回復(fù)到室溫使用。

      使用方法:
      A. 細(xì)胞總蛋白提取
      1. 每500 μl裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入5 μl PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
      2. 取5-10×106個(gè)細(xì)胞,在4℃,500 g條件下離心5-10分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,盡可能吸干,收集細(xì)胞。
      3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
      4. 每5×106個(gè)細(xì)胞中加入500 μl冷的裂解液,混勻后,在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
      5. 在4℃,16,000 g條件下離心15分鐘。
      6. 快速將上清轉(zhuǎn)移至另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到總蛋白。

      B. 組織總蛋白提取
      1. 每500 μl裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入5 μl PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
      2. 取100 mg組織樣本剪碎,加入裂解液,用組織勻漿器勻漿至無(wú)明顯肉眼可見(jiàn)固體。
      3. 將組織勻漿吸入另一預(yù)冷的干凈離心管中,在4℃,16000 g條件下離心5分鐘。
      4. 快速將上清轉(zhuǎn)移至另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到總蛋白。
      上述蛋白提取物可立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),或分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br /> 注意事項(xiàng):1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑可冰上預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。
      2. 整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫狀態(tài)。
      3. 蛋白濃度用BCA法測(cè)定 。

      Genenode|君諾德公司

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