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Cell Cycle Analysis Kit (RNAase)細(xì)胞周期檢測試劑盒

包裝規(guī)格：

17109-100	Cell Cycle Analysis Kit (RNAase)細(xì)胞周期檢測試劑盒	100T	450元
17109-200	Cell Cycle Analysis Kit (RNAase)細(xì)胞周期檢測試劑盒	200T	700元

產(chǎn)品介紹:

碘化丙啶(Propidium，簡稱PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強(qiáng)度和雙鏈 DNA的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的 DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞進(jìn)行 DNA含量測定，然后根據(jù) DNA含量的分布情況，可以進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。碘化丙啶染色后，假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為 1，那么含有雙份基因組DNA的 G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為 2，正在進(jìn)行 DNA復(fù)制的 S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為 1-2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生 DNA片段化(DNA fragmentation)導(dǎo)致部分基因組 DNA片斷在染色過程中丟失，因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強(qiáng)度小于 1，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的 sub-G1峰，即凋亡細(xì)胞峰。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側(cè)向光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期，前向和側(cè)向光散射的信號均降低。因此可通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞光散射的變化觀察細(xì)胞凋亡情況。
本試劑盒通常應(yīng)用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測。如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài)，才可以進(jìn)行檢測。
本試劑盒每個(gè)樣品的細(xì)胞數(shù)量可以為10-100萬。

儲(chǔ)存條件:
碘化丙啶染色液(25X)需避光保存。染色緩沖液和碘化丙錠溶液25x4℃保存，RANase-20℃保存。12個(gè)月內(nèi)有效。

注意事項(xiàng):
本試劑盒需使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。
需自備PBS、95%乙醇。
熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
碘化丙啶對人體有刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

試劑盒組份： 
1.染色緩沖液
體積： 
100 Tests: 40ml 
200 Tests: 80ml 
2.碘化丙錠溶液 25x（Propidium Iodide, PI 25X）
體積：
100 Tests: 1.5ml 
200 Tests: 3.0ml 
3. RNase A（5mg/ml）
體積：
100 Tests: 0.2ml 
200 Tests: 0.4ml

使用說明： 
1.細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備： 
a.對于貼壁細(xì)胞：小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時(shí)，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。 1000rpm左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約 1毫升冰浴預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清。再次加入1毫升冰浴預(yù)冷的 PBS，重懸細(xì)胞。 
b.對于懸浮細(xì)胞：1000rpm左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約1毫升冰浴預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。再次加入1毫升冰浴預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞。 
2.細(xì)胞固定：4毫升冰浴預(yù)冷的95%乙醇，低速渦旋震蕩的同時(shí)逐滴加入1毫升細(xì)胞懸液（在冰上操作），混勻后4℃固定2小時(shí)或更長時(shí)間。固定12-24小時(shí)可能效果更佳。1000rpm左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的乙醇，以避免吸走細(xì)胞。加入約5毫升冰浴預(yù)冷的 PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。 
3.碘化丙啶染色液的配制：參考下表，根據(jù)待檢測樣品的數(shù)量配制適量的碘化丙啶染色液： 

	1個(gè)樣品	6個(gè)樣品	12個(gè)樣品
染色緩沖液	0.4ml	2.4ml	4.8ml
碘化丙啶染色液 (25X)	15μl	90μl	180μl
RNaseA(5mg/ml)	2μl	12μl	24μl

注：配制好的碘化丙啶染色液短時(shí)間內(nèi)可以4℃保存，宜當(dāng)日使用。 
4.染色：每管細(xì)胞樣品中加入0.4毫升碘化丙啶染色液，緩慢并充分重懸細(xì)胞沉淀，37℃避光溫浴 30分鐘。隨后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小時(shí)內(nèi)完成流式檢測，最好能在當(dāng)日完成流式檢測。 
5.流式檢測和分析：用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長488nm波長處檢測紅色熒光，同時(shí)檢測光散射情況。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞DNA含量分析和光散射分析。