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RNA清潔純化試劑盒(RNAclean)

RNA Cleanup and Concentration Kit(Column)

包裝規(guī)格：

一.產(chǎn)品介紹：
RNAclean清潔純化試劑盒，使用離心吸附柱硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。在高鹽條件下RNA 與硅膠吸附膜高效、專一地結(jié)合，同時(shí)最大限度除去蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽離子和許多有機(jī)雜質(zhì)等，在低鹽條件下，RNA 被洗脫。可處理的RNA 樣品量可高達(dá)50μg。本試劑盒用于從酶反應(yīng)液（如DNase 處理、蛋白酶處理、RNA 標(biāo)記等）中純化回收RNA，也可用于從其它方式提取獲得的RNA 的純化。 純化的總RNA 沒(méi)有蛋白的污染，所得的RNA 可用于Northern blot、Dot blot、mRNA 提取、cDNA合成、引物延伸、差異顯示等。

二.儲(chǔ)存條件：
1.所有的溶液應(yīng)該是澄清的，如果環(huán)境溫度低時(shí)溶液可能形成沉淀，此時(shí)不應(yīng)該直接使用，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。

2.避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

三.操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
提示：
      第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后請(qǐng)及時(shí)打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
      以下所有步驟均可以在室溫進(jìn)行，但是應(yīng)該迅速操作，減少RNA降解機(jī)會(huì)。

1.冰上RNA樣品加入 RNase-free water 補(bǔ)足至100μl，加入350μl 溶液RC，混勻。

2.加入250μl 無(wú)水乙醇，混勻，無(wú)需離心。

3.上一步所得溶液和可能有的沉淀一起轉(zhuǎn)入吸附柱RA中（吸附柱套在收集管內(nèi)），4℃ 12,000 rpm 離心45秒，棄掉收集管中的廢液，將吸附柱重新套回收集管。

   如需去除DNA微量殘留，可在本步驟后進(jìn)行DNA酶柱子上直接消化，詳見(jiàn)附錄。

4.加 0.5ml 漂洗液RW（請(qǐng)先檢查是否已加入乙醇），4℃ 12,000 rpm 離心45秒，棄廢液。

5.加 0.5ml 漂洗液RW，4℃ 12,000 rpm 離心45秒，棄廢液。

6.4℃ 13,000 rpm 離心2 分鐘，盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

7.取出吸附柱RA，放入一個(gè)RNase free離心管中，根據(jù)預(yù)期RNA產(chǎn)量在吸附膜的中間部位加50-80μl RNase free water（事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好）， 室溫放置2分鐘，  12,000 rpm 離心1分鐘。如果需要較多RNA，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，離心1分鐘,或者另外再加30μl RNase free water，離心一分鐘，合并兩次洗脫液。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要RNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是最小體積最好不少于30μl，體積過(guò)小降低RNA洗脫效率，減少RNA產(chǎn)量。

附錄：DNase I 柱上消化
       本試劑盒還可以進(jìn)行離心柱上DNA酶消化以去除RNA樣品中微量DNA污染, 如果要進(jìn)行嚴(yán)格的mRNA表達(dá)量分析如熒光定量PCR,可以購(gòu)買各種商品化的RNase free DNase直接在離心吸附柱子RA上面消化DNA，然后純凈RNA可以洗脫下來(lái)直接使用?？蛻艨筛鶕?jù)需要向本公司購(gòu)買去蛋白液RW1。

以2127  DNase I 柱上消化DNA試劑盒舉例：
DNase I 工作液的配制：
取45μl DNase I buffer和5μl RNase free DNase I離心管輕輕吹打混勻成工作液（處理多個(gè)離心柱子要按照比例放大制備工作液）。
注：如果殘留DNA過(guò)多導(dǎo)致消化不完全，可按比例加大使用酶量來(lái)提高消化效果（如90μl DNase I buffer和10μl RNase free DNase I）。

操作步驟：
1.前面按照正常步驟操作，在步驟3完成后按照以下步驟操作。

2.向吸附柱RA 中加入350μl去蛋白液RW1，12,000 rpm 離心30 秒，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。

3.向吸附柱RA 中央加入50μl的DNase I 工作液，室溫（20-30℃）放置15 分鐘。注意直接將工作液滴在膜中央上，不要讓工作液滴在O型圈或是離心柱管壁上。

4.向吸附柱RA 中加入350μl去蛋白液RW1， 12,000 rpm 離心30-60 秒，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。

5.接漂洗液RW步驟等后續(xù)步驟。如果是其它公司試劑盒，則接最后的一個(gè)漂洗液漂洗等后續(xù)步驟。

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