產(chǎn)品中心

瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒(離心柱型)

Agarose Gel DNA Extraction Kit(Column)

包裝規(guī)格：

一.產(chǎn)品介紹：
   在高離序鹽存在的情況下，DNA片斷選擇性的吸附于離心柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜上，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，漂洗液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質(zhì)去除，最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

二.產(chǎn)品特點：
1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜采用進口公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.溶膠液加酚紅調(diào)制成為了黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測pH值變化從而達到最佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。
4.改進的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性，即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
5.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。

三.儲存條件：
1.所有的溶液應(yīng)該是澄清的，如果環(huán)境溫度低時溶液可能形成沉淀，此時不應(yīng)該直接使用，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。使用前應(yīng)該恢復(fù)到室溫。
2.儲存于低溫（4℃或者－20℃）會造成溶液沉淀，影響使用效果，因此運輸和儲存均在室溫下（15℃-25℃）進行。
3.避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。

四.注意事項：
1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。
2.溶膠液中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要立即用大量清水或者生理鹽水沖洗。
3.回收純化的DNA片段一般在100bp到40kb之間，過長、過短片段的回收效率迅速降低。
4.回收DNA的量和起始DNA的量、洗脫體積、DNA片斷大小有關(guān)。一般1-15μg， 100bp-5kb的DNA片段，回收率可高達85％。
5.切膠回收時，紫外燈觀察對DNA片段有損壞作用，應(yīng)該盡可能使用能量低的長波紫外線，并且盡可能的縮短紫外線下處理的時間。
6.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA， 不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫， 但應(yīng)該確保pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫，DNA片段應(yīng)該保存在－20℃。DNA片段如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時可以適當稀釋。

關(guān)于平衡液的使用
1.介紹：核酸吸附硅膠膜柱子長期放置過程中會同空氣中的電荷/塵埃發(fā)生反應(yīng)而影響其核酸的結(jié)合能力。硅膠柱經(jīng)平衡液預(yù)處理后可大大減少柱子中硅膠膜的憎水基團，提高核酸的結(jié)合能力。從而提高硅膠柱子回收效率或者產(chǎn)量。平衡液是強堿性溶液，若不小心碰到，請用大量自來水清洗。用完后需蓋緊瓶蓋，以免接觸空氣。室溫保存。在保存過程中可能有沉淀生成，請加熱至37℃使沉淀完全消失。
2.使用方法：取一個新的硅膠膜吸附柱子裝在收集管中，吸取100μl的平衡液至柱子中。13000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中廢液，將吸附柱子重新放回收集管。此時平衡液預(yù)處理柱子完畢。接后續(xù)的操作步驟。

五.操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）
   提示：第一次使用前請先在漂洗液WB中加入指定量無水乙醇，加入后請及時打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!
1.在長波紫外燈下，用干凈刀片將所需回收的DNA條帶切下，盡量切除不含DNA的凝膠，得到凝膠體積越小越好。

2.將切下的含有DNA條帶凝膠放入1.5ml離心管，稱重。
先稱一個空1.5ml離心管重量，然后放入凝膠塊后再稱一次，兩次重量相減，得到凝膠的重量。

3.加3倍體積溶膠液DD。
如果凝膠重為100mg，其體積可視為100μl，則加入300μl溶膠液。
如果凝膠濃度大于2％，應(yīng)加入6倍體積溶膠液。

4.56℃水浴放置10分鐘（或直至膠完全溶解）。每2-3分鐘渦旋震蕩一次幫助加速溶解。

5.可選,一般不需要：每100mg最初的凝膠重量加入150μl的異丙醇，震蕩混勻。
有時候加入異丙醇可以提高回收率，加入后不要離心?；厥沾笥?Kb的片段時，不加入異丙醇，加入有時反而可能降低回收效率。

平衡液預(yù)處理吸附柱：
使用平衡液預(yù)處理硅膠膜吸附柱為必做步驟，具體方法參見前文“關(guān)于平衡液的使用”

6.將上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室溫放置1分鐘，12,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。
如果總體積超過750μl，可分兩次將溶液加入同一個吸附柱EC中。
過濾下的溶膠液和收集管內(nèi)殘存的強堿性平衡液混合后，溶膠液可能會從黃色變成橘紅甚至紫色，此為酚紅PH指示劑堿性條件下的正常顏色變化。

7.加入600μl漂洗液WB （請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。

8.加入600μl漂洗液WB，12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。 

9.將吸附柱EC放回空收集管中，12,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

10.取出吸附柱EC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加50μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好），室溫放置2分鐘，12,000rpm 離心1分鐘。如果需要較多量DNA，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，離心1分鐘。

洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當減少洗脫體積， 但是最小體積不應(yīng)少于25μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少產(chǎn)量。