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實驗室常用試劑、緩沖液的配制方法

1M Tris-HCl(pH7.4，7.6，8.0)

□組份濃度 1 M Tris-HCl

□配制量   1L

□配制方法 

1.稱量121.1 gTris置于l L燒杯中。

2.加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?

3.按下表加入濃HCl量調(diào)節(jié)所需要的pH值。

pH值	濃HCl
7.4	約70 ml
7.6	約60 ml
8.0	約42ml

4.將溶液定容至1 L。

5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。

注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高l℃，溶液的pH值大約降低0.03個單位。

1.5 M Tris-HCl(pH8.8)         

□組份濃度  1.5 M Tris-HCl

□配制量   1 L

□配制方法  

1.稱量181.7 gTris置于1 L燒杯中。

2.加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?

3.用濃HCl調(diào)節(jié)pH值至8.8。

4.將溶液定容至1 L。

5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。

注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高l℃，溶液的pH值大約降低0.03個單位。

 

1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6，8.0)        

□組份濃度 100 mMTris-HCl，10 mMEDTA

□配制量   1 L

□配制方法  1.量取下列溶液，置于l L燒杯中。

1 MTris-HCl Buffer(pH7.4，7.6，8.0)	100 ml
500 mMEDTA(pH8.0)	20 ml

2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，均勻混合。

3.將溶液定容至1 L后，高溫高壓滅菌。

4.室溫保存。

 

1 ×TE Buffer (pH8.0)        

□ 組份濃度  10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA

□ 配制量   1 L

□ 配制方法  1.量取下列溶液，置于l L燒杯中。

1 MTris-HCl Buffer(pH8.0)	100 ml
500 mMEDTA(pH8.0)	20 ml

2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，均勻混合。

3.將溶液定容至1 L后，高溫高壓滅菌。

4.室溫保存。

3 M醋酸鈉(pH5.2)           

□組份濃度 3 M醋酸鈉

□配制量    100 ml

□配制方法  

1.稱量40.8 gNaOAc·3H2O置于100~200 ml燒杯中，加入約40 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?

2.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。

3.加去離子水將溶液定容至100 ml。

4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。

PBS Buffer       

□組份濃度 137 mMNaCl，2.7 mMKCl，10 mMNa2HPO4，2 mMKH2PO4

□配制量   1 L

□配制方法  

1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。

NaCl	8 g
KCl	0.2 g
Na2HPO4	1.42 g
KH2PO4	0.27 g

2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?

3.滴加濃HCl將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。

4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。

注意：上述PBS Buffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充1 mMCaCl2和0.5 mMMgCl2。

10 M醋酸銨   

□組份濃度 10 M醋酸銨

□配制量    100 ml

□配制方法  

1.稱量77.1 g醋酸銨置于100~200 ml燒杯中，加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?

2.加去離子水將溶液定容至100 ml。

3.使用0.22 μm濾膜過濾除菌。

4.密封瓶，室溫保存。

注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。

Tris-HCl平衡苯酚   

□配制方法  

1.使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須，160℃對其進(jìn)行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實驗。

2.操作注意：苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：因為在酸性pH條件下DNA分配于有機(jī)相，因此使用苯酚前必須對苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

①液化苯酚應(yīng)貯存于-20℃，此時的苯酚呈結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。

②加入羥基喹啉(8-Quinolinol)至終濃度0.1%。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時因其呈黃色，有助于方便識別有機(jī)相。

③加入等體積的1 MTris-HCl(pH8.0)，使用磁力攪拌器攪拌l5min，靜置使其充分分層后，除去上層水相。

④重復(fù)操作步驟③。

⑤加入等體積的0.1 MTris-HCl(pH8.0)。使用磁力攪拌器攪拌l5min，靜置使其充分分層后，除去上層水相。

⑥重復(fù)操作步驟⑤，稍微殘留部分上層水相。

⑦使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于7.8。

⑧將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)

□配制方法 

1.說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時常常使用苯酚，氯仿/異戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。 

2.配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24:1)混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

10% (W/V) SDS   

□組份濃度  10%(W/V)SDS

□配制量    100 ml

□配制方法  

1.稱量10 g高純度的SDS置于100~200 ml燒杯中，加入約80 ml的去離子水，68℃加熱溶解。

2.滴加濃HCl調(diào)節(jié)pH值至7.2。

3.將溶液定容至100 ml后，室溫保存。

2 N NaOH   

□組份濃度  2 N NaOH

□配制量    100 ml

□公式      m=CVM=（2 mol/l *0. 1L*40 g/mol）=8 g

□配制方法  

1.量取80 ml去離子水置于100~200 ml塑料燒杯中(NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。

2.稱取8 gNaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液定容至100 ml。

4.將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。

注意：N是當(dāng)量濃度。對于一價酸堿來說，1N=1M。對于二價或者高價的酸堿來說，摩爾濃度=當(dāng)量濃度/價數(shù)。比方說1M的硫酸是2N，當(dāng)量=摩爾*價態(tài)，對于硫酸來說1 mol/L=2 N。

2.5 N HCl

□組份濃度  2.5 N HCl

□配制量    100 ml

□公式      m=CVM

□配制方法 

1.在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃HCl(11.6 N)，均勻混合。

2.室溫保存。

5 M NaCl   

□組份濃度 5 MNaCl

□配制量   1 L

□配制方法  

1.稱量292.2 gNaCl置于1 L燒杯中，加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。

2.加去離子水將溶液定容至1 L后，適量分成小份。   

3.高溫高壓滅菌后，4℃保存。

20% (W/V) Glucose(葡萄糖)

□組份濃度  20% (W/V) Glucose

□配制量    100 ml

□配制方法  

1.稱取20 gGlucose置于100~200 ml燒杯中，加入約80 ml的去離子水后。攪拌溶解。

2.加去離子水將溶液定容至l 00 ml。

3.高溫高壓滅菌后，4℃保存。

Solution l (質(zhì)粒提取用)

□組份濃度 25 mMTris-HCl(pH8.0)，10 mMEDTA，50 mMGlucose

□配制量   1 L

□配制方法  

1.量取下列溶液，置于l L燒杯中。

1 MTris-HCl(pH8.0)	25 ml
0.5 MEDTA(pH8.0)	20 ml
20% Glucose(1.11 M)	45 ml
dH2O	910 ml

2.高溫高壓滅菌后，4℃保存。

3.使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。

SolutionⅡ(質(zhì)粒提取用)

□組份濃度 200 mMNaOH，1%(W/V)SDS

□配制量    500 ml

□配制方法  

1.量取下列溶液，置于500 ml燒杯中。

10% SDS	50 ml
2N Na0H	50 ml

2.加滅菌水定容至500 ml，充分混勻。

3.室溫保存。此溶液保存時間最好不要超過一個月。

注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要劇烈攪拌。

SolutionⅢ(質(zhì)粒提取用)

□組份濃度 3 MKOAc，5 MCH?COOH (ethanoic acid=acetic acid)

□配制量    500 ml

□配制方法  

1.稱量下列試劑，置于500 ml燒杯中。

KOAc醋酸鉀	147g
CH?COOH乙酸	57.5ml

2.加入300 ml去離子水后攪拌溶解。

3.加去離子水將溶液定容至500 ml。

4.高溫高壓滅菌后，4℃保存。

0.5 MEDTA (pH8.0) 

□組份濃度 0.5 MEDTA

□配制量   1 L

□配制方法  

1.稱取186.1 gNa2EDTA·2H2O，置于1 L燒杯中。

2.加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?

3.用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0(約20g NaOH)。注意：pH值至8.0時，EDTA才能完全溶解。

4.加去離子水將溶液定容至1 L。

5.適量分成小份后，高溫高壓滅菌。

6.室溫保存。 

1 MDTT   

□組份濃度 1 MDTT

□配制量    20 ml

□配制方法  

1.稱取3.09 gDTT，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。

2.加20 ml的0.01 MNaOAc(pH5.2)，溶解后使用0.22 μm濾膜過濾除菌。

3.適量分成小份后，-20℃保存。

10 mM ATP   

□組份濃度 10 mMATP

□配制量    20 mL

□配制方法  

1.稱取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。

2.加20 ml的25 mMTris-HCl(pH8.0)，攪拌溶解。

3.適量分成小份后，-20℃保存。