產(chǎn)品中心

快捷型植物基因組DNA提取試劑盒(溶液型)

Quick Plant DNA Isolation Kit(Solution)

包裝規(guī)格：

一.產(chǎn)品介紹：
本試劑盒采用獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，特別適合從植物干粉或者新鮮植物材料中提取基因組DNA。無需酚/氯仿抽提，使用安全方便，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。對(duì)樣品的起始重量沒有限制，實(shí)驗(yàn)者可根據(jù)自己的需求靈活調(diào)整。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒回收的DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。

二.產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑。
2.快速，簡(jiǎn)捷，操作整個(gè)過程可在1個(gè)小時(shí)內(nèi)完成。
結(jié)果穩(wěn)定，產(chǎn)量高（比離心柱型的產(chǎn)量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9，長(zhǎng)度可達(dá)50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)以及文庫構(gòu)建。

三.儲(chǔ)存條件：
1.緩沖液AP1、AP2低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃-65℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，不要?jiǎng)×覔u晃，以免形成過量的泡沫?；謴?fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2.避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

四.注意事項(xiàng)：
1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000 rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
2.用戶需自備異丙醇、70％乙醇、液氮研缽、水浴箱。
3.開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱好備用。
4.本試劑盒為溶液型，可以很容易的按照比例擴(kuò)大或者縮小每次處理的量，請(qǐng)聯(lián)系我們索取其它處理量的操作手冊(cè)。

五.操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
1.取適量植物組織（新鮮組織100 mg 或干重組織20 mg）在研缽中加入液氮充分碾磨成細(xì)粉。

2.轉(zhuǎn)移細(xì)粉到一個(gè)1.5ml離心管，不要解凍，加入400μl緩沖液AP1 和4μl RNase A(10 mg/ml)，旋渦振蕩，充分混勻幫助裂解。
如果組織裂解困難，可根據(jù)需要加一個(gè)輕柔勻漿10秒的步驟幫助裂解。大多數(shù)情況下不需要離心去除未完全裂解的組織，因?yàn)楹竺嬗幸粋€(gè)離心去除的步驟。

3.65℃水浴10分鐘，在水浴過程中顛倒離心管2-3次，混合樣品。

4.加入130 μl 緩沖液AP2，充分混勻，冰上放置5分鐘， 14,000 rpm 離心5 分鐘，小心吸取上清到一個(gè)新的1.5ml離心管，注意不要吸到界面物質(zhì)。

5.可選步驟：將上清液再次14,000 rpm (~13,400×g )離心5 分鐘，小心緩慢吸取上清到一個(gè)新的1.5ml離心管中，不要吸到沉淀。
此步驟目的為去除上清液中的沉淀雜質(zhì)，使提取基因組DNA 純度更高。

6.加入0.7體積的室溫異丙醇（例如500μl的上清液加350μl 異丙醇），顛倒30次混勻或者直到出現(xiàn)棉絮狀（絲狀）白色DNA沉淀。

7.12,000rpm離心2分鐘，在管底可以見到白色的DNA沉淀塊，倒棄上清。

8.加入1ml 70％乙醇，顛倒幾次漂洗DNA沉淀，12,000rpm離心1分鐘， 倒去上清（注意不要把DNA沉淀倒掉了），倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，還可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘。
注意不要干燥過頭，否則DNA極其難溶；也不能殘留太多乙醇，否則乙醇可能抑制下游如酶切反應(yīng)。

9.加入適量DNA溶解液重新水化溶解DNA沉淀，輕彈管壁混勻，可以放置在65℃溫育30-60分鐘（不要超過一小時(shí)），期間不時(shí)的輕彈管壁幫助重新水化DNA。也可以在室溫或者4℃放置過夜來重新水化DNA。

10.DNA可以存放在2-8℃，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在－20℃。