產(chǎn)品中心

小量全血基因組DNA提取試劑盒(溶液型)

Mini Blood DNA Isolation Kit(Solution)

包裝規(guī)格：

一.產(chǎn)品介紹：
本試劑盒不需要使用有毒的苯酚氯仿等試劑，根據(jù)全血特點采用幾個快速步驟提取基因組DNA，首先紅細胞裂解液裂解去除不含DNA的紅細胞，細胞核裂解液裂解白細胞釋放出基因組DNA， 然后蛋白沉淀液選擇性沉淀去除蛋白，最后純凈的基因組DNA通過異丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液，操作步驟簡單，實驗成本低，產(chǎn)量高，純度好，適合各種下游實驗。

二.產(chǎn)品特點：
1.從十幾個配方中優(yōu)選出的紅細胞裂解液配方，裂解快速完全。
2.不需要使用有毒的苯酚氯仿等試劑。
3.快速，簡捷，單個樣品操作一般可在30分鐘內(nèi)完成。
4.結(jié)果穩(wěn)定，產(chǎn)量高（典型的產(chǎn)量300μl全血可提取出4-15μg），OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9，長度可達50Kb-150kb，可直接用于構(gòu)建文庫、PCR、Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。

三.適用范圍：
適用于快速提取各種動物全血基因組DNA。

四. 試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性：

五.儲存事項：

1.環(huán)境溫度低時細胞核裂解液中某些去污劑成份會析出出現(xiàn)渾濁或者沉淀，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清，不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。

2.蛋白沉淀液可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影響使用效果，直接取用上層溶液即可。

3.避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。

六. 注意事項
1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

2.用戶需自備異丙醇和70％乙醇。

3.典型的產(chǎn)量300μl全血可提取出5-15μg 基因組DNA（不同樣品尤其疾病樣品中白細胞數(shù)量差異可能非常大，因此產(chǎn)量的個體差異也可能非常大）。

4.溶液型全血基因組DNA提取方法，可以很容易的按照比例擴大或者縮小每次處理的全血量（20μl-10ml），需要具體產(chǎn)品操作說明，請聯(lián)系我們索取不同處理量的操作手冊。

5.本試劑盒可運用于多種抗凝劑的全血，如EDTA、檸檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白細胞沉淀團很難打散重懸，影響裂解效果，建議選用非肝素的抗凝劑收集血液標(biāo)本。

6.為了最佳效果，最好使用新鮮血液標(biāo)本或者4℃存放小于3天的標(biāo)本，不要使用反復(fù)凍融超過3次的標(biāo)本，否則會嚴(yán)重降低產(chǎn)量。

7.對于每個樣品提取血量大或者用量大的客戶，可以和我們聯(lián)系，我們另外專門準(zhǔn)備有優(yōu)惠的大包裝試劑。

七. 操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）
本試劑盒為溶液型，可按照比例擴大或縮小每次處理的全血量（20μl-10ml）

1.吸取900μl 1x紅細胞裂解液（需要先稀釋到1x）到一個1.5ml離心管。使用前應(yīng)該用去離子水將10x紅細胞裂解液稀釋10倍到1x。

2.將抗凝全血（使用前回復(fù)到室溫）顛倒混勻后，吸取300μl加到上步裝有紅細胞裂解液的離心管中，顛倒6-8次，并倒置輕彈管壁，確保充分混勻。

3.室溫放置10分鐘（期間應(yīng)該顛倒輕彈，混勻數(shù)次幫助裂解紅細胞）。

4.12,000rpm離心1分鐘，倒棄紅色上清，在吸水紙上倒扣離心管吸凈管口殘留的血液，之后再加入300μl紅細胞裂解液上下顛倒幾次，靜置1-2分鐘，12,000rpm離心1分鐘，之后倒棄紅色上清。

5.用1ml藍槍頭吸取300μl預(yù)熱（50℃）的細胞核裂解液上下吹打離心管底部的細胞團，上下吹打10-15次幫助裂解白細胞至溶液清亮，不可吹打過猛，以免吹斷基因組DNA，也不能吹出氣泡，之后放入60-65℃培養(yǎng)箱孵育大約10-20分鐘至溶液清亮。 
備注：如果底部有紅色凝固血塊無法吹散，可加入10ul蛋白酶K（20mg/ml）溶液，立刻漩渦振蕩混勻，放入50℃培養(yǎng)箱孵育大約30-60分鐘至溶液清亮。

6.可選步驟，一般不需要：在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至終濃度30μg/ml，顛倒25次混勻，37℃溫育15分鐘去除殘留RNA，然后冷卻回室溫。

7.加入100-150μl蛋白沉淀液后，在渦旋振蕩器上高速連續(xù)振蕩混勻25秒?；靹蚝罂赡芤姷揭恍┬〉牡鞍讏F塊。

8.13,000rpm離心5分鐘。這時候應(yīng)該可以見到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能見到一些蛋白沉淀漂浮在液體表面。

9.小心吸取或者倒出上清（約450μl）到一個新的1.5ml離心管中。吸取上清時，注意不要吸到管底和漂浮在液體表面的蛋白沉淀，如果不小心將蛋白沉淀轉(zhuǎn)入新的離心管中，可再次離心2分鐘后取上清。

10.加入等體積的室溫異丙醇300-450μl，輕柔顛倒30次混勻或者直到出現(xiàn)棉絮狀（絲狀）白色DNA沉淀。
 注意：有時候棉絮狀（絲狀）DNA沉淀顛倒混勻時，粘附在蓋子或者管口處，即使顛倒也不下來，或者附著有氣泡導(dǎo)致漂浮在液面，這樣導(dǎo)致操作者看不到沉淀，誤認為沒有得到DNA。

11.12,000rpm離心1分鐘，在管底可以見到白色DNA沉淀塊，倒棄上清。 

12.加入500ml 70％乙醇，顛倒幾次漂洗DNA沉淀，12,000rpm離心1分鐘， 倒去上清（如果DNA沉淀貼壁不牢固，注意不要把DNA沉淀倒掉了）后檢查白色DNA沉淀是否存在，粘附在蓋子或者管口處的DNA需要用黃槍頭調(diào)撥到離心管底。所有EP管需倒置在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，也可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘。注意不要干燥過頭，否則DNA極其難溶，也不能殘留太多乙醇，否則乙醇可能抑制下游如酶切反應(yīng)。

13.加入100μl DNA溶解液重新溶解DNA沉淀，輕彈管壁混勻，可以放置在65℃溫育30-60分鐘（不要超過一小時），期間不時的輕彈管壁幫助重新水化DNA，也可以在室溫或者4℃放置1-5天來重新水化DNA。

14.DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。