產(chǎn)品中心

CTAB法大量植物基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)

CTAB Maxi Plant DNA Extraction Kit(Column)

包裝規(guī)格：

一.產(chǎn)品介紹：
改進(jìn)的經(jīng)典CTAB植物DNA抽提液內(nèi)（添加多種針對(duì)植物特點(diǎn)的多糖、多酚去除成份）迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，氯仿抽提后通過離心清除多糖、多酚和蛋白質(zhì)，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟， 進(jìn)一步將多糖、多酚和細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

三.產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
3.快速，簡捷，單個(gè)樣品操作一般可在1小時(shí)內(nèi)完成。
4.數(shù)種去多糖、多酚成份和多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9，長度可達(dá)30 kb -50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。

四.適用范圍：
    適用于快速提取植物基因組DNA.

五.儲(chǔ)存條件：
1.裂解液PL、結(jié)合液PQ或者抑制物去除液IR低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在55℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2.避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

六.注意事項(xiàng)：
1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到9,000xg，可容納50ml離心管的臺(tái)式離心機(jī)。
2.開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到65℃?zhèn)溆谩?br /> 3.需要自備氯仿或者氯仿/異戊醇（體積比24：1混合）、無水乙醇和β-巰基乙醇。
4.結(jié)合液PQ 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
5.不同來源的植物組織材料中提取DNA 的量會(huì)有差異，一般100mg新鮮組織典型產(chǎn)量可達(dá)3-25μg。
6.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA， 不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫， 但應(yīng)該確保pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。


七.操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
    第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB和結(jié)合液PQ中加入指定量的無水乙醇，充分混勻，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
    取所需適量裂解液PL放置在65℃預(yù)熱，使用前加入β-巰基乙醇到終濃度2%。

1.取適量植物組織（新鮮組織1-2克 或干重組織0.3-0.4克）在研缽中加入液氮充分碾磨成細(xì)粉。

2.轉(zhuǎn)移細(xì)粉到一個(gè)50 ml離心管，不要解凍，加10 ml 65℃預(yù)熱的裂解液PL (確認(rèn)已加入β-巰基乙醇至2%)，劇烈渦旋振蕩混勻，用大口徑槍頭輕柔吹打幫助裂解。
如果組織裂解困難，可根據(jù)需要加一個(gè)輕柔勻漿10秒的步驟幫助裂解。

3.65℃水浴30-60分鐘，在水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。
可選:如果組織干燥或者產(chǎn)量低，可以適當(dāng)延長水浴時(shí)間。如果RNA殘留多，可在水浴前加入100μl RNA酶（20mg/ml）。
注：如果提取的DNA殘留RNA較多導(dǎo)致電泳時(shí)候條帶拖尾，條帶扭曲，背景很高等不正常電泳情況，可以加1% RNA酶（10mg/ml）37℃或者室溫放置半小時(shí)即可消化RNA，消化完后不需要特殊處理便可用于PCR或者酶切。
加入10 ml氯仿或者氯仿/異戊醇（體積比24：1混合），顛倒充分混勻幾分鐘（或者渦旋混勻），9,000xg 以上離心10分鐘。
若提取的植物組織富含多糖多酚，可以在第4步前用等體積酚/氯仿（1：1）抽提一遍。

4.小心吸取上清到一個(gè)新的50 ml離心管，注意不要吸到界面物質(zhì)。
如上清比較渾濁，則需要重復(fù)步驟4一遍，直到得到透亮上清。

5.較精確估算上清量，加入1.5倍體積結(jié)合液PQ （請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!）后立刻渦旋，充分混勻。此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀，但不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

6.將上一步所得混合物（包括可能出現(xiàn)的沉淀）加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）靜置2分鐘， 9,000xg離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液（每次最多可加20 ml混合物離心，棄廢液，再加入剩余的溶液，再次離心）。

7.加入10 ml抑制物去除液IR，9,000xg離心2分鐘，棄廢液。

8.加入10 ml漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），9,000xg離心2分鐘，棄掉廢液。

9.重復(fù)操作步驟9一遍。

10.將吸附柱AC放回空收集管中，最高速（最好大于9000xg，如果離心機(jī)轉(zhuǎn)速低，需要相應(yīng)延長離心時(shí)間）離心10-15分鐘以干燥膜基質(zhì)殘留乙醇，用槍頭吸除內(nèi)圈壓環(huán)和柱壁之間可能殘留的乙醇，室溫或者烘箱晾干幾分鐘。
該步驟目的為徹底去除吸附柱中殘留乙醇，殘留乙醇抑制下游反應(yīng)并且嚴(yán)重降低洗脫效率，降低DNA產(chǎn)量。如果洗脫產(chǎn)量低，則必須加做步驟12。

11.可選步驟: 選擇以下兩種方法之一干燥柱子：
 1)取下柱子放置于真空容器中，密封真空容器，提供真空15分鐘；
 2)將柱子放置于60－65℃真空干燥箱或烘箱中，放置10-15分鐘。

12.取出吸附柱AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加1.5-2ml洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好），室溫放置3-5分鐘分鐘，9000 xg離心4-5分鐘。如果需要較多量DNA，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，離心2分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果預(yù)計(jì)和需要產(chǎn)量高，可增大洗脫體積，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是最小體積不應(yīng)少于1ml，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。

13.DNA可以存放在2-8℃，如果要長時(shí)間存放，可以放置在－20℃。