產(chǎn)品中心

酵母基因組DNA提取試劑盒(溶液型)

Yeast DNA Isolation Kit(Solution)

包裝規(guī)格：

一.產(chǎn)品介紹：

    本試劑盒用于快速的從酵母中提取基因組DNA。在針對酵母細(xì)胞特點(diǎn)配制的酵母裂解液作用下， 酵母細(xì)胞被裂解釋放出基因組DNA，然后蛋白沉淀液選擇性沉淀去除蛋白，最后純凈的基因組DNA通過異丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

二.產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑。
2.快速，簡捷，整個過程可在1個小時內(nèi)完成。
3.結(jié)果穩(wěn)定，產(chǎn)量高（比離心柱型的產(chǎn)量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9，長度可達(dá)50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)以及文庫構(gòu)建。

三.儲存條件：
1.環(huán)境溫度低時酵母裂解液中某些去污劑成份會析出出現(xiàn)渾濁或者沉淀，可在37℃水浴加熱幾分鐘，輕輕旋搖，即可恢復(fù)澄清，不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。
2.蛋白沉淀液可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影響使用效果，直接取用上層溶液即可。
3.避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。

四.操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）
1.吸取1.5ml 酵母培養(yǎng)物到一個1.5ml離心管； 12,000rpm離心2分鐘，盡可能棄上清，必要時候可以用槍吸去。

2.高速渦旋振蕩，打散重懸酵母細(xì)胞團(tuán)。

3.加入300μl酵母裂解液，渦旋振蕩混勻，或者用1毫升的槍頭反復(fù)吹打混勻。
酵母細(xì)胞的重懸分散對下一步裂解非常重要，必須充分分散重懸。

4.將裂解物放置在70℃水浴15-30分鐘。
如果產(chǎn)量低，可以適當(dāng)提高水浴溫度和延長水浴時間，中間可以渦旋振蕩混勻幾次幫助裂解。

5.冰上至少5分鐘使回復(fù)到室溫。

6.在回復(fù)到室溫的裂解物內(nèi)加入100μl蛋白沉淀液后，在渦旋振蕩器上高速連續(xù)振蕩混勻20秒?；靹蚝罂赡芤姷揭恍┬〉牡鞍讏F(tuán)塊。冰浴5分鐘。

7.13,000rpm離心5-10分鐘。這時應(yīng)該可以見到管底蛋白沉淀，也可能見到一些蛋白沉淀漂浮在液體表面。

8.小心緩慢吸取上清到一個新的1.5ml離心管中，不要吸到沉淀。
吸取上清時，注意不要吸到管底的和漂浮在液體表面的蛋白沉淀。如果不小心將蛋白沉淀轉(zhuǎn)入新的離心管中，可再次離心2分鐘后取上清。

9.加入等體積的室溫異丙醇（約400μl），顛倒30次混勻或者直到出現(xiàn)絮狀DNA沉淀（或者白色渾濁沉淀）。

10.12,000rpm離心1分鐘，在管底可以見到白色的DNA沉淀塊，倒棄上清。

11.加入1ml 70％乙醇，顛倒幾次漂洗DNA沉淀，12,000rpm離心1分鐘， 倒去上清（注意不要把DNA沉淀倒掉了），倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，還可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘。
注意不要干燥過頭，否則DNA極其難溶；也不能殘留太多乙醇，否則乙醇可能抑制下游如酶切反應(yīng)。

12.加入40μl DNA溶解液重新水化溶解DNA沉淀，輕彈管壁混勻，可以放置在65℃溫育30-60分鐘（不要超過一小時），也可以在室溫或者4℃放置過夜來重新水化DNA。期間不時的輕彈管壁幫助重新水化DNA。

13.加入10-15μl RNase A（10mg/ml），或者1-2μl RNase A（100mg/ml）顛倒混勻，37℃溫育30－60分鐘去除殘留RNA。
該步驟主要作用為去除殘留的RNA，如果殘留RNA多，可以適當(dāng)延長時間。如果殘留RNA不影響實驗，可略去該步驟。如果殘留的RNA酶可能影響實驗，也可以用等體積酚/氯仿抽提去除，然后用標(biāo)準(zhǔn)的乙醇沉淀回收DNA。

14.DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。