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HyPure?真菌基因組DNA快速提取試劑盒(離心柱型)

Fungus DNA Extraction Kit(Column)

包裝規(guī)格：

一.產(chǎn)品介紹：
    該試劑盒采用DNA吸附柱和新型獨(dú)特的溶液系統(tǒng)，適合于從真菌組織細(xì)胞中快速簡(jiǎn)單地提取基因組DNA?？稍?0分鐘內(nèi)完成一個(gè)或多個(gè)100mg新鮮或20mg干燥的真菌樣品DNA的純化工作。提取過程不需要用到有毒的酚氯仿等有機(jī)物抽提，也不需要用到耗時(shí)的異丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖類、酚類和酶抑制物等雜質(zhì)，純化的DNA可直接用于PCR、酶切和雜交等實(shí)驗(yàn)。
    新鮮或干燥的真菌組織（細(xì)胞）磨碎后經(jīng)裂解液裂解；蛋白質(zhì)、多糖、細(xì)胞殘片被沉淀去除；然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟, 進(jìn)一步將多糖，多酚和細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除， 最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

二.產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好?？朔藝?guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
3.快速，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在1小時(shí)內(nèi)完成。
4.數(shù)種去多糖、多酚成份和多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。

三.適用范圍：
     適用于快速提取真菌組織細(xì)胞基因組DNA。

四.儲(chǔ)存條件：
1.裂解液AP1、AP3/E低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在65℃水浴幾分鐘幫助重新溶解（AP3加入乙醇前可加熱，加入乙醇后不可加熱），恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2.避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

五.注意事項(xiàng)：
1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13，000 rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
2.開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到65℃?zhèn)溆谩?br /> 3.緩沖液AP3/E中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4.不同來源的真菌組織細(xì)胞材料中提取DNA 的量會(huì)有差異，一般100mg新鮮組織典型產(chǎn)量可達(dá)3-25μg。
5.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA， 不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫， 但應(yīng)該確保pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長(zhǎng)期保存，可以用TE緩沖液洗脫 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。
6.真菌種類復(fù)雜，沒有一種試劑盒可以提取所有種類的真菌DNA。如果有的真菌多糖多酚含量過于豐富、次級(jí)代謝產(chǎn)物太復(fù)雜導(dǎo)致本試劑盒效果不佳，可以選擇本公司的2516B CTAB法植物DNA提取試劑盒提取真菌，一般該試劑盒對(duì)于多糖多酚次級(jí)代謝產(chǎn)物復(fù)雜的真菌DNA提取效果良好。


六.操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
   提示：
    第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB中加入指定量無水乙醇，充分混勻，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
    第一次使用前請(qǐng)先在緩沖液AP3/E中加入指定量無水乙醇!

1.取適量真菌組織在研缽中加入液氮充分碾磨成細(xì)粉。

2.轉(zhuǎn)移細(xì)粉（新鮮真菌組織100 mg 或干重組織20 mg）到一個(gè)1.5ml離心管，不要解凍，加入400μl緩沖液AP1 和4μl RNase A(10 mg/ml)，旋渦振蕩，充分混勻幫助裂解。
如果組織裂解困難，可根據(jù)需要加一個(gè)輕柔勻漿10秒的步驟幫助裂解。大多數(shù)情況下不需要離心去除未完全裂解的組織，因?yàn)楹竺嬗幸粋€(gè)離心去除的步驟。
可選：多糖含量特別高的時(shí)候可以在AP1加入2%PVP40，000; 多酚含量特別高的時(shí)候可以在AP1中加入0.2% beta巰基乙醇。也可兩者同時(shí)加入。

3.65℃水浴10分鐘，在水浴過程中顛倒離心管2-3次，混合樣品。

4.加入130 μl 緩沖液AP2，充分混勻，冰上放置5分鐘， 14,000 rpm 離心5-10 分鐘，小心吸取上清到一個(gè)新的1.5ml離心管，注意不要吸到界面物質(zhì)。

5.計(jì)算上清量，加入1.5倍體積的AP3/E（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），立即吹打混勻。
加入AP3/E可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，但不影響DNA提取。注意將AP3/E直接加入到上清并立即吹打混勻。

6.將上一步所得混合物（包括可能出現(xiàn)的沉淀）加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液（先加650μl離心，棄廢液，再加入剩余的溶液，再次離心）。

7.加入600μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。

8.加入600μl漂洗液WB，12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。

9.將吸附柱AC放回空收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

10.取出吸附柱AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB， 室溫放置3-5分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000 rpm離心1分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果預(yù)計(jì)和需要產(chǎn)量高，可增大洗脫體積，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是最小體積不應(yīng)少于50μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。

DNA可以存放在2-8℃,如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在－20℃。