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      pIAT1轉(zhuǎn)移載體

      Super ibac P DNA Kit/昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)/昆蟲表達(dá)系統(tǒng)/分泌蛋白/跨膜蛋白/毒性蛋白/完美替代Bac-to-Bac

      產(chǎn)品編號(hào):201801

      產(chǎn)品規(guī)格:3 ug

      產(chǎn)品價(jià)格:820

      包裝:個(gè)

      儲(chǔ)存條件:-20℃

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      pIAT1轉(zhuǎn)移載體

      包裝規(guī)格:

      200801 pIAT1轉(zhuǎn)移載體 3μg 820元


      產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

            轉(zhuǎn)移載體pIAT1啟動(dòng)子AcMNPV p6.9為可較早啟動(dòng)蛋白表達(dá),利于蛋白后加工,和Super ibac S DNA一起使用,可以更好的提高重組蛋白的翻譯效率及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌通路的效率,提高重組蛋白的產(chǎn)量和質(zhì)量。尤其適合糖基化蛋白,分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白等難表達(dá)的蛋白。 


            本載體設(shè)有多個(gè)單克隆位點(diǎn),沒(méi)有加入固定的起始密碼子和終止密碼子,用戶可根據(jù)需求靈活設(shè)計(jì)起始密碼子和終止密碼子的位置。


      運(yùn)輸及保存條件:

      低溫運(yùn)輸,-20℃保存。

       

      產(chǎn)品規(guī)格及組分:

      組分名稱

      規(guī)格

      pIAT1

      20ul

       

      載體圖譜:(省略,詳情見(jiàn)說(shuō)明書)


      MCS(多克隆位點(diǎn)):

      pIAT1多克隆位點(diǎn)MCS


      昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)BEVS介紹

           昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(Baculovirus Expression Vector System-BEVS)  廣泛應(yīng)用于科研和工業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域。與其他常用的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)相比,昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)具有外源基因表達(dá)水平高、易于表達(dá)異源多聚體蛋白、安全性等優(yōu)勢(shì),表達(dá)的重組蛋白通常具有正確的翻譯后修飾和生物學(xué)活性,如二硫鍵的形成、磷酸化、糖基化等等。同時(shí)昆蟲細(xì)胞懸浮生長(zhǎng),容易放大培養(yǎng),有利于大規(guī)模表達(dá)重組蛋白。

       

            Genenode君諾德公司,國(guó)內(nèi)獨(dú)家提供自產(chǎn)的第二代昆蟲桿狀病毒表達(dá)產(chǎn)品Super ibac,包括桿狀病毒DNA(Super ibac DNA),轉(zhuǎn)移載體(pIAT),對(duì)照轉(zhuǎn)移載體(pIAT GFP)和Super ibac DNA Kit。相較于其他類似產(chǎn)品,我們價(jià)格更優(yōu)惠,供貨更迅速,同時(shí)還可以提供更快速、高效、經(jīng)濟(jì)的昆蟲桿狀病毒表達(dá)重組蛋白服務(wù),自主研發(fā)生產(chǎn)的桿狀病毒表達(dá)試劑盒可以達(dá)到更高的重組蛋白表達(dá)水平,經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員能夠?yàn)槟扑]最適合的服務(wù),迅速解決在表達(dá)純化過(guò)程中遇到的問(wèn)題。


      技術(shù)原理:

      SuperiBac系統(tǒng)是一個(gè)全新的生產(chǎn)重組桿狀病毒的技術(shù)平臺(tái),免去了從親代病毒中篩選重組病毒的步驟,不需要進(jìn)行空斑實(shí)驗(yàn),一步法桿狀病毒蛋白表達(dá)系統(tǒng),是目前最領(lǐng)先的桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)。

       

      通過(guò)對(duì)桿狀病毒DNA的復(fù)制必需基因進(jìn)行修改,使其不能在昆蟲細(xì)胞中正常復(fù)制,只有和對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)移載體同源重組,修復(fù)其復(fù)制必需基因,才能在昆蟲細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制,只有當(dāng)Super ibac DNA和攜帶目的基因的轉(zhuǎn)移載體pIAT成功同源重組后,才能在昆蟲細(xì)胞中復(fù)制存活,因此共轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞后無(wú)需任何篩選,重組率為100%,一步法轉(zhuǎn)染,簡(jiǎn)單快速,尤其經(jīng)過(guò)基因改造后,重組蛋白更穩(wěn)定,蛋白生物活性更高,適合分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白等難表達(dá)的蛋白。

       

      Super ibac昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)技術(shù)特點(diǎn):

      1.重組蛋白表達(dá)水平高(最高可達(dá)細(xì)胞總蛋白的50%),大多數(shù)為有生物功能的可溶性蛋白;

      2.真核表達(dá)系統(tǒng),重組蛋白生物學(xué)活性高,能同時(shí)表達(dá)多個(gè)外源基因;

      3.可進(jìn)行翻譯后修飾:磷酸化修飾, 形成正確折疊的二硫鍵, 進(jìn)行N-和O-型糖基化修飾

      4.表達(dá)人源化蛋白,昆蟲細(xì)胞中糖基化途徑克服人源糖蛋白的問(wèn)題。

      5.大多數(shù)昆蟲細(xì)胞系在不加血清培養(yǎng)基中快速生長(zhǎng),得到高滴度病毒和高產(chǎn)量重組蛋白;

      6.相對(duì)于其他真核表達(dá)系統(tǒng)成本較低,硬件設(shè)施成本低接近于原核表達(dá),無(wú)需CO2培養(yǎng)箱,無(wú)需血清培養(yǎng)基;

      7.規(guī)?;囵B(yǎng)簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì),適合自動(dòng)化生產(chǎn),昆蟲細(xì)胞比哺乳動(dòng)物細(xì)胞操作簡(jiǎn)單;

      8.商業(yè)化的BEVS系統(tǒng)讓病毒重組及蛋白表達(dá)變得更簡(jiǎn)單;

       

      不同蛋白表達(dá)系統(tǒng)的比較:


       

      優(yōu)點(diǎn)

      缺點(diǎn)

      大腸桿菌

            遺傳背景清楚、培養(yǎng)費(fèi)用低、耐受能力強(qiáng)、抗污染
            能力強(qiáng)、穩(wěn)定   性好、適用范圍廣


           缺乏蛋白質(zhì)翻譯后加工機(jī)制;

           目的蛋白常以包涵體形式釋放,產(chǎn)物純化
           困難,表達(dá)的蛋白生物活性低

      哺乳動(dòng)物細(xì)胞

           表達(dá)的蛋白能進(jìn)行翻譯后修飾并正確的折疊;
           能組成性或誘導(dǎo)性地表達(dá)目的蛋白;
           目的蛋白更接近天然狀態(tài),適用于表達(dá)完整的大分子

          表達(dá)量低、操作繁瑣、成本較高、
          不適合用于蛋白大規(guī)模生產(chǎn)

      酵母細(xì)胞

           生長(zhǎng)繁殖速度快,培養(yǎng)條件普通,可大規(guī)模生產(chǎn),
           成本相對(duì)低

           能夠得到折疊及修飾后的蛋白質(zhì)

           高水平表達(dá)蛋白質(zhì)

           可克服異源蛋白降解

               大多的重組蛋白表達(dá)效率較低、
               過(guò)度糖基化

      昆蟲桿狀病毒

           高效重組:重組率100%

           能同時(shí)表達(dá)多個(gè)外源基因

           表達(dá)產(chǎn)量高,超過(guò)50%蛋白可被表達(dá)

           可進(jìn)行翻譯后的各種修飾

          相比如其他表達(dá)系統(tǒng),該系統(tǒng)成本低,硬件設(shè)施要求低,     無(wú)需CO2培養(yǎng)箱,無(wú)需血清培養(yǎng)基

          培養(yǎng)簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì),適合自動(dòng)化生產(chǎn)

       



        

                                                                         不同桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的比較


      桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)介紹(BEVS)

      第一代表達(dá)系統(tǒng):

      Bac-to-Bac

      1.需要先在大腸桿菌系統(tǒng)中生產(chǎn)重組病毒,篩選純化后再轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞;

      2.重組效率非常低,大量篩選工作。

      第一代表達(dá)系統(tǒng):

      BacPAK6/BaculoGold

      1.將桿狀病毒DNA線性化,引入多個(gè)Bsu361限制性酶切位點(diǎn);

      2.Bsu361不能100%切割病毒DNA使之線性化,重組病毒仍需要進(jìn)行空斑篩選。

      第一代表達(dá)系統(tǒng):

      BaculoDirect

      1.桿狀病毒DNA線性化;

      2.需要利用更昔洛韋(核苷類似物)篩選重組病毒,對(duì)細(xì)胞有毒性;

      3.重組效率低,需要好幾輪的擴(kuò)繁。

      第二代表達(dá)系統(tǒng):

      iBac(Genenode)

      1.高效重組:重組率100%,經(jīng)基因改造,僅重組病毒才能成活,無(wú)需加抗生素和任何篩選工作;

      2.蛋白質(zhì)量高:經(jīng)基因改造,提高分泌蛋白效率,重組蛋白更穩(wěn)定,蛋白生物活性更高;

      3.適用于難表達(dá)的蛋白:分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白;

       

      轉(zhuǎn)染GFP基因:

      轉(zhuǎn)染GFP基因 Bac-Bac 

      桿狀病毒宿主細(xì)胞:

      細(xì)胞系

      來(lái)源

      應(yīng)用

      培養(yǎng)基

      Sf-9

      Spodopterafrugiperda

      Sf-9 (Pupal ovarian tissue)

      重組桿狀病毒生產(chǎn)

      胞內(nèi)蛋白表達(dá)

      空斑分析

      Sf-900II/III SFM

      HyQ SFX

      Sf-21

      Spodopterafrugiperda

      Sf-21 (Pupal ovarian tissue)

      胞內(nèi)蛋白表達(dá)

      重組分泌蛋白

      Sf-900II/III SFM

      ESF-921

      HyQ SFX

      Hi-5

      Trichoplusiani

      Hi-5 (Ovarian cells)

      重組分泌蛋白

      EX-CELL 405

      Express Five SFM

      HyQ SFX

      Tri-Ex

      Sf-9 derivative

      胞內(nèi)蛋白表達(dá)

      TriEX

       

      桿狀病毒DNA的選擇:

      桿狀病毒DNA

      特點(diǎn)

      Super ibac S DNA

      適合常規(guī)蛋白表達(dá),尤其適合糖基化蛋白,分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白等難表達(dá)的蛋白。


      Super ibac P DNA

      專門開(kāi)發(fā)用于表達(dá)蛋白生產(chǎn)病毒顆粒(VLP),也適用于胞質(zhì)蛋白的表達(dá)。

       

      產(chǎn)品線(具體請(qǐng)?jiān)儍r(jià)):

      貨號(hào)

      產(chǎn)品名稱

      產(chǎn)品規(guī)格

      備注

      202818

      Super ibac S DNA Kit

      5rnx

      試劑盒(all-in-one kit)

      200818

      Super ibac S DNA

      5rnx

      桿狀病毒DNA

      201801

      pIAT1

      3 ug

      轉(zhuǎn)移載體

      201802

      pIAT2

      3 ug

      轉(zhuǎn)移載體

      201803

      pIAT GFP

      3 ug

      對(duì)照轉(zhuǎn)移載體

      202816

      Super ibac P DNA Kit

      5rnx

      試劑盒(all-in-one kit)

      200816  

      Super ibac P DNA

      5rnx

      桿狀病毒DNA

        



      桿狀病毒DNA的選擇:

      桿狀病毒DNA

      特點(diǎn)

      Super ibac S DNA

      適合常規(guī)蛋白表達(dá),尤其適合糖基化蛋白,分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白等難表達(dá)的蛋白。

      Super ibac P DNA

      專門開(kāi)發(fā)用于表達(dá)蛋白生產(chǎn)病毒顆粒(VLP),也適用于胞質(zhì)蛋白的表達(dá)。

       

      產(chǎn)品線(具體請(qǐng)?jiān)儍r(jià)):

      貨號(hào)

      產(chǎn)品名稱

      產(chǎn)品規(guī)格

      備注

      202818

      Super ibac S DNA Kit

      5rnx

      試劑盒(all-in-one kit)

      200818

      Super ibac S DNA

      5rnx

      桿狀病毒DNA

      201801

      pIAT1

      3 ug

      轉(zhuǎn)移載體

      201802

      pIAT2

      3 ug

      轉(zhuǎn)移載體

      201803

      pIAT GFP

      5rnx

      對(duì)照轉(zhuǎn)移載體

      202816

      Super ibac P DNA Kit

      5rnx

      試劑盒(all-in-one kit)

      200816

      Super ibac P DNA

      5rnx

      桿狀病毒DNA


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