產(chǎn)品中心

miRNA SYBR Green qPCR Mix

miRNA熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：

貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	目錄價(jià)
P4308-100	miRNA SYBR Green qPCR Mix	100T*20ul	400
P4308-200	miRNA SYBR Green qPCR Mix	100T*20ul	750
P4308-500	miRNA SYBR Green qPCR Mix	500T*20ul	1600

產(chǎn)品介紹：
miRNA熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒采用本試劑盒采用SYBR Green I 嵌合熒光法的原理進(jìn)行miRNA 熒光定量檢測(cè)。本試劑盒包含miRNA 熒光定量檢測(cè)的所有試劑，包括2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。2×miRNA qPCR Mix（含Sybr Green）是專門為miRNA 定量檢測(cè)而研發(fā)的新一代預(yù)混形式的熒光定量PCR 檢測(cè)試劑，其中的DNA polymerase 采用的是抗體修飾的熱啟動(dòng)形式， 配合特殊的Buffer 體系，使反應(yīng)特異性更好，靈敏度更高，并能在更廣的范圍內(nèi)進(jìn)行準(zhǔn)確定量。
注：該試劑盒須與 miRNA cDNA Synthesis Kit(miRNA第一鏈合成試劑盒)（4205A）配套使用。

產(chǎn)品存儲(chǔ)：
-20 ℃ 避光保存至少6個(gè)月，使用前充分融解混勻。2 x miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)短期使用可放在4 ℃，避免反復(fù)凍融。Reverse primer(10μM )每次用完置-20 ℃保存。

需自備的試劑：
1.分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)級(jí)別的水（無(wú)核酸酶）
2.待檢測(cè)miRNA對(duì)應(yīng)的qPCR上游引物（Forward primer）

Forward Primer設(shè)計(jì)原則：
1.遵循引物設(shè)計(jì)的最普遍原則。
2.以成熟的miRNA 序列為基礎(chǔ)，將U 替換成T，這是最基礎(chǔ)和最簡(jiǎn)單的設(shè)計(jì)方法。
3.試劑盒中提供的下游引物的Tm 值為65℃，設(shè)計(jì)上游引物的Tm 值要盡量保證在65℃左右。
4.若按照原則2 的方式直接設(shè)計(jì)的引物其Tm 值過(guò)低，可以在引物的5’端添加幾個(gè)堿基（最好為G 或C 堿基）；也可以在3’端添加1 個(gè)或幾個(gè)A 堿基；或者5’端和3’端同時(shí)修飾。
5.若按照原則2 的方式直接設(shè)計(jì)的引物其Tm 值過(guò)高，可以在引物的5’或3’端去掉幾個(gè)堿基。

注意事項(xiàng)：
1.miRNA 第一鏈cDNA 的加入量不要超過(guò)real time PCR 體積1/10。
2.對(duì)于特殊的檢測(cè)體系中，高含量的cDNA 模板易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，根據(jù)所檢測(cè)miRNA 的豐度適當(dāng)?shù)南♂宑DNA（10倍或者100倍）。
3.本品中含有熒光染料Sybr Green I，保存本品或配制PCR反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。
4.2 x miRNA qPCR Mix不含參比染料ROX，客戶并根據(jù)qPCR儀器技術(shù)指導(dǎo)決定是否需要加ROX參比染料，用于消除信號(hào)本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差，配套R(shí)OX產(chǎn)品貨號(hào)為PC38 Rox Reference Dye。

操作步驟：
1. 在室溫融化2 x miRNA qPCR Mix和Reverse primer（10μM）。
2. 使用時(shí)請(qǐng)將2 x miRNA qPCR Mix上下顛倒輕輕均勻混合，避免起泡，并經(jīng)輕微離心后使用。如果試劑沒有混勻，其反應(yīng)性能會(huì)有所下降。注：請(qǐng)不要使用振蕩器混勻。
3. 按照下表組分冰上進(jìn)行反應(yīng)液的配制