產(chǎn)品中心

RT-Basic RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(基礎(chǔ)型)

包裝規(guī)格：

用于RNA擴(kuò)增，電泳檢測(cè)

一. 原理概述：

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)：在恒溫條件下（42 °C），特殊修飾的反轉(zhuǎn)錄酶利用特異性引物DNA和模板RNA合成cDNA鏈，反應(yīng)體系中的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進(jìn)行快速核酸擴(kuò)增反應(yīng)。適用于實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的RNA擴(kuò)增以及其他檢測(cè)用途的RNA擴(kuò)增使用。

二. 產(chǎn)品特點(diǎn)：
本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時(shí)間短（僅需30 mins）等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)組分為干粉狀態(tài)，操作簡(jiǎn)便，易于保存。
本試劑對(duì)設(shè)備要求低，金屬浴、水浴鍋等即可進(jìn)行反應(yīng)操作，無(wú)需購(gòu)買(mǎi)PCR擴(kuò)增儀等價(jià)格高昂的專(zhuān)屬設(shè)備。

三. 引物設(shè)計(jì)：

1. 建議使用長(zhǎng)度在30-35 bp的引物，引物過(guò)短會(huì)影響擴(kuò)增速度和檢測(cè)靈敏度；

2. 堿基排布隨機(jī)性高，GC 含量在 30%-70%之間；

3. 引物設(shè)計(jì)避免形成二級(jí)結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增；

4. 擴(kuò)增子長(zhǎng)度建議在150-300 bp，通常不超過(guò)500 bp。

提前30分鐘將試劑盒所需組分取出，室溫融化，震蕩混勻。

1).每個(gè)干粉反應(yīng)管加入32.9 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混勻，否則會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)效果產(chǎn)生影響）；

2).每個(gè)反應(yīng)管分別加入2 μL上游引物和2 μL下游引物（引物濃度10 μM，對(duì)于多個(gè)反應(yīng)、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應(yīng)管中）；

3).向反應(yīng)管中依次加入7 μL ddH2O和3 μL核酸RNA模板（可根據(jù)核酸濃度調(diào)整加入的核酸模板體積，并相應(yīng)調(diào)整加入的ddH2O體積，至模板與ddH2O總體積為10.6 μL）; 

4).最后向反應(yīng)管中加入2.5 μL B Buffer并充分混合（對(duì)于多個(gè)反應(yīng)，建議將B Buffer加至反應(yīng)管的蓋子內(nèi)側(cè)，上下顛倒反應(yīng)管8-10次混勻）；

5).混勻后，將反應(yīng)液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應(yīng)管放入恒溫設(shè)備中42 oC孵育30 mins；

6).反應(yīng)結(jié)束后，使用PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒純化回收擴(kuò)增產(chǎn)物，或者加入50 μL Tris飽和酚/氯仿/異戊醇（25：24：1）抽提液，1:1抽提反應(yīng)溶液，12000 rpm離心5 min，最后取5 μL上清進(jìn)行電泳檢測(cè)。