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RT-nfo RNA恒溫快速擴增試劑盒(膠體金試紙條型)

包裝規(guī)格：

A4613-50

RT-nfo RNA恒溫快速擴增試劑盒(試紙條型)

48T

2100元

用于RNA擴增，試紙條檢測

配套使用產(chǎn)品：

編號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	價格
A4603-48	nfo-DNA恒溫快速擴增試劑盒(膠體金試紙條型)	48T	2000
A4613-50	RT-nfo RNA恒溫快速擴增試劑盒(膠體金試紙條型)	48T	2100
A4631-50	LFD一次性核酸檢測試紙條(單標(biāo))	50T	1500
A4632-50	LFD2一次性核酸檢測試紙條(雙標(biāo))	50T	2000
A4634-50	LFD-ECS1防核酸污染一次性核酸檢測試紙條(單標(biāo))	50T	3600
A4635-50	LFD-ECS2防核酸污染一次性核酸檢測試紙條(雙標(biāo))	50T	4200

一. 原理概述：

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術(shù)：在常溫恒溫下，特殊修飾的反轉(zhuǎn)錄酶利用特異性引物和模板RNA合成cDNA鏈，反應(yīng)體系中的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進(jìn)行快速核酸擴增反應(yīng)。依賴nfo酶的作用，加入根據(jù)模版設(shè)計的特異的分子探針，使用膠體金技術(shù)（三明治夾心法）可以對最終結(jié)果進(jìn)行檢測。

二. 產(chǎn)品特點：
本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應(yīng)時間短（僅需12 mins）等優(yōu)點，反應(yīng)組分為干粉狀態(tài)，操作簡便，易于保存。
本試劑對設(shè)備要求低，金屬浴、水浴鍋等即可進(jìn)行反應(yīng)操作，無需購買PCR擴增儀等價格高昂的專屬設(shè)備。

三. 引物設(shè)計：
1. 建議使用長度在 30-35 bp的引物，引物過短會影響擴增速度和檢測靈敏度；
2. 堿基排布隨機性高，GC 含量在 30%-70%之間；
3. 下游引物的5’端標(biāo)記一個修飾基團(tuán)（常用生物素Biotin）；
4. 引物設(shè)計避免形成二級結(jié)構(gòu)而影響擴增；
5. 擴增子長度建議在150-300 bp，通常不超過500 bp。

四. 熒光探針設(shè)計：
在上下游引物中間，設(shè)計一段長度為 46-52nt 與目的片段互補的序列作為膠體金探針；
探針序列不與特異性引物識別位點重疊，長度為 46-52 nt，序列避免回文序列、內(nèi)部二級結(jié)構(gòu)和連續(xù)的重復(fù)堿基。

探針共有三個修飾位點：
1. 5’端修飾一個抗原標(biāo)記（FAM）；
2. 在距 5’端約 30nt 序列位置上標(biāo)記一個 dSpacer（四氫呋喃，THF），作為 nfo 的識別位點；

3. THF 距離 3’末端約 15 nt，并且 3’末端標(biāo)記一個修飾基團(tuán)，例如胺基、磷酸基團(tuán)或 C3-spacer。

五. 試劑盒儲存：
運輸條件：低溫運輸；
儲存條件：儲存溫度 ≤ -20 oC，避光保存，避免重壓、反復(fù)凍融；
產(chǎn)品有效期：12個月。 

六. 操作步驟：
提前30分鐘將試劑盒所需組分取出，室溫融化，震蕩混勻。

1).每個干粉反應(yīng)管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混勻，否則會對實驗效果產(chǎn)生影響）；

2).每個反應(yīng)管分別加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探針（引物和探針濃度為10 μM，對于多個反應(yīng)、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應(yīng)管中）；

3).向反應(yīng)管中依次加入7 μL ddH2O和3 μL核酸RNA模板（可根據(jù)核酸濃度調(diào)整加入的核酸模板體積，并相應(yīng)調(diào)整加入的ddH2O體積，至模板與ddH2O總體積為13.5 μL）；

4).最后向反應(yīng)管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（對于多個反應(yīng)，建議將B buffer加至反應(yīng)管的蓋子內(nèi)側(cè)，上下顛倒反應(yīng)管8-10次混勻）；

5).混勻后，將反應(yīng)液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應(yīng)管放入恒溫設(shè)備中37-39 oC孵育8-12 mins；

6).反應(yīng)結(jié)束后，取10 μL加入含有190 μL ddH2O的離心管中，混合均勻后，將膠體金試紙條的樣品端插入離心管中平衡，5 mins內(nèi)觀察質(zhì)控線與檢測線判讀結(jié)果。